Хлорофилът е зелен пигмент, открит във висшите растения и всички други фотосинтезиращи организми. Хлорофил А и хлорофил Б са разтворими в етанол, етер и ацетон и други разтворители, неразтворими във вода и петролев етер, следователно могат да използват полярни разтворители като ацетон, метанол, етанол, етилацетат и т.н., за да извлекат хлорофил.
Процес на извличане на хлорофил:
Хлорофилната екстракция се приготвя в полутъмна стая при 25 градуса С. Стъпките на екстракцията са както следва:
(1) Вземете 1000 грама пресни зелени листа и ги натрошете в Wechsler.
(2) Поставете натрошените 1000 грама зелени листа в ацетон с малко количество калциев карбонат (температура 20 градуса) за екстракция, докато фрагментите от листа са безцветни след филтриране и почистване.
(3) Поставете филтрирания ацетонов екстракт във фуния, съдържаща 1 литър петролеев етер и 100 ml ацетон, след което леко завъртете, докато добавяте дестилирана вода, докато се разслои. Повечето от ацетона и водоразтворимите примеси във водния слой се изхвърлят, оставяйки само разтвор на петролев етер.
(4) След като разтворът на петролев етер се пречиства отново с дестилирана вода, той се почиства повече от 5 пъти с 200 ml 80 процента метанолов разтвор, съдържащ петролев етер и 0,01 g оксалова киселина, и накрая се получава жълто-зелена суспензия .
(5) Изсушете суспензията с безводен натриев сулфат и я инфилтрирайте в колона, направена от прах от захароза с дебелина 3 cm. След това почистете утаените пигменти, за да премахнете каротеноидите и да ги накарате да съдържат само естествен хлорофил.
(6) Захарозната колона, съдържаща естествен хлорофил, е разделена на два слоя, зеленият слой има 4-10 mm слой хлорофил B, другият син слой е 2-6 mm слой хлорофил A.
(7) Частта, разположена в средата на синия слой (около половината от синия слой) се поставя в етер, суспензията се филтрира и екстрахира, почиства се с дестилирана вода, изсушава се с натриев сулфат и се филтрува с прибори, за да се получи хлорофил А.
(8) Отстранете средната част на зеления слой в (6) и бързо го поставете в етер за филтриране и промиване, за да направите етерен разтвор на хлорофил В.
Как да се разделим по време на екстракция?
Хроматографията е важен метод за разделяне, пречистване и идентифициране на органични съединения, особено в микроанализа, който се използва широко. Пигментите в плодовете и зеленчуците включват главно мастноразтворим каротин, лутеин, хлорофил и водоразтворим антоцианин. При екстракционни експерименти можем да използваме принципа на подобно смесваемо филтриране на водоразтворими антоцианини, което от своя страна може да използва тънкослойна хроматография, колонна хроматография, високоефективна течна хроматография (HPLC) за отделяне на бета-каротин, лутеин и хлорофил, отслабен поради полярността на трите вида пигменти на свой ред, може да бъде подходящо избран единичен органичен разтворител или различно съотношение на смесен разтворител като разширителен агент и елуиращ агент. Бяха определени оптималните условия на разделяне.
